注意事項
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附上 DNA 樣品之電泳照片-拍立得或同等級照片
請註明 DNA 樣品之 loading 量與 DNA marker 之使用量。 -
DNA 樣品 & Primer 之濃度與需求量
- 單股 DNA、雙股 DNA 及 PCR 產物之定序
- DNA & primer 皆溶於 ddH2O中， OD260 / OD280 > 1.8
- PCR product 需經純化
- 若為 multiple bands，則需以 Agarose gel 回收純化
- 需求量：DNA=10 ul / reaction， primer= 5 ul / reaction，濃度表如下：
濃度表
| Template Type | Template 濃度 | Primer 濃度 | 本中心提供之 Stander Primer |
|---|---|---|---|
| PCR product: < 200 bp 200 - 500 bp 500 - 1000 bp 1000 - 2000 bp > 2000 bp |
(ng/ul) 10 (ng/ul) 20 (ng/ul) 40 (ng/ul) 80 (ng/ul) 100 (ng/ul) |
5 (pmol/ul) |
T7： 5' TAATACGACTCACTATAGGG 3' T3： 5' ATTAACCCTCACTAAAGGGA 3' T7 terminator： 5' GCTAGTTATTGCTCAGCGGT3' SP6： 5' ATTTAGGTGACACTATAG 3' M13-forward： 5' TGTAAAACGACGGCCAGT 3' M13-reverse： 5' TCACACAGGAAACAGCTATGAC 3' 其他Primer請自備 |
| Single-strended DNA | 100 (ng/ul) | 5 (pmol/ul) | |
| Double-strended DNA (4-15 kb) |
200 (ng/ul) | 5 (pmol/ul) | |
| Large DNA (plasmids over ~ 20 kb, cosmids, lambda clones) |
500 (ng/ul) | 30 (pmol/ul) | |
| Large DNA (P1 colnes, BACs) |
1000 (ng/ul) | 30 (pmol/ul) |
